Giáo trình Sinh học phân tử - Chương 5: Phiên mã

Sinh học phân tử 95 
Chương 5 
Phiên mã 
Phiên mã là quá trình tổng hợp RNA từ khuôn mẫu DNA. Quá trình 
này về phương diện hóa học và enzyme rất giống với quá trình tái bản DNA. 
Cả hai đều liên quan đến các enzyme tổng hợp một chuỗi nucleic acid mới 
bổ sung với khuôn mẫu DNA. Tất nhiên, hai quá trình này có những khác 
biệt quan trọng, mà đáng chú ý nhất là chuỗi mới trong quá trình phiên mã 
được tạo thành từ các ribonucleotide thay vì các deoxyribonucleotide. Các 
nguyên tắc cơ bản của quá trình phiên mã được thiết lập dựa vào nghiên cứu 
trên prokaryote (E. coli) nhưng dường như các nguyên tắc này cũng có tính 
phổ biến cho cả eukaryote. Tuy nhiên, do sự khác biệt về cấu trúc genome 
và hệ thống enzyme nên sự phiên mã ở prokaryote và eukaryote cũng có 
những đặc trưng nhất định. 
I. Các đặc điểm cơ bản của quá trình phiên mã 
1. Sự phiên mã tạo ra RNA bổ sung với một sợi DNA 
Các ribonucleotide nối tiếp của RNA được xác định dựa trên nguyên 
tắc bổ sung với các nucleotide trên DNA khuôn mẫu. Khi sự bắt cặp chính 
xác xảy ra, ribonucleotide tiếp theo được liên kết đồng hóa trị với chuỗi 
RNA đang hình thành nhờ phản ứng có enzyme xúc tác. Như vậy, sản phẩm 
phiên mã được kéo dài từng ribonucleotide một và bổ sung chính xác với 
sợi DNA được dùng làm khuôn mẫu. 
Quá trình phiên mã dù có tính chính xác cao nhưng vẫn kém hơn 
nhiều so với quá trình tái bản DNA (tỷ lệ mắc lỗi là 1/10.000 nucleotide so 
với 1/10.000.000 trong tái bản). Đó là do sự thiếu một cơ chế sửa sai hữu 
hiệu, mặc dù trong quá trình tổng hợp RNA cũng có hai dạng sửa sai tồn tại. 
Tuy nhiên, vì các RNA được phiên mã không bao giờ được sao chép lại nên 
các sai sót xảy ra không ảnh hưởng đến việc truyền đạt thông tin cho thế hệ 
sau. 
Sinh học phân tử 96 
2. Sự phiên mã là một phản ứng enzyme 
Những enzyme chịu trách nhiệm cho quá trình phiên mã ở cả tế bào 
prokaryote và eukaryote đều được gọi là RNA polymerase phụ thuộc DNA 
(DNA-dependent RNA polymerase), gọi tắt là RNA polymerase. 
RNA polymerase xúc tác hình thành các cầu nối phospho-diester để 
nối các ribonucleotide thành một chuỗi thẳng. Enzyme dịch chuyển từng 
bước dọc theo DNA khuôn mẫu và kéo dài chuỗi RNA theo hướng từ 
5’ 3’, nghĩa là các ribonucleotide được thêm vào đầu 3’ của chuỗi RNA 
đang hình thành. Các cơ chất được sử dụng để tổng hợp RNA là ATP, GTP, 
CTP và UTP. Cũng giống như trong sự tái bản DNA, năng lượng cho phản 
ứng được cung cấp từ sự thủy phân các cầu nối giàu năng lượng của các cơ 
chất nói trên. 
3. Sự phiên mã chỉ sao chép chọn lọc một số phần của genome và tạo ra 
nhiều bản sao 
Sự lựa chọn vùng nào để phiên mã không phải xảy ra ngẫu nhiên. Mỗi 
vùng phiên mã điển hình bao gồm một hoặc nhiều gen, có những trình tự 
DNA đặc hiệu hướng dẫn khởi đầu và kết thúc phiên mã. 
Đối với một vùng được chọn phiên mã, có thể có một đến hàng trăm 
thậm chí cả nghìn bản sao RNA được tạo ra. Sự tổng hợp phân tử RNA sau 
được bắt đầu trước khi phân tử RNA trước hoàn thành. Từ một gen đơn độc, 
trong vòng một giờ có thể tổng hợp được hơn một nghìn phân tử RNA (đối 
với eukaryote). 
Sự lựa chọn vùng nào để phiên mã và mức độ phiên mã đều được điều 
hòa. Vì vậy, trong những tế bào khác nhau hoặc trong cùng một tế bào 
nhưng ở những thời điểm khác nhau sẽ có những nhóm gen khác nhau được 
phiên mã. 
4. Chỉ một trong hai sợi đơn của phân tử DNA được dùng làm khuôn mẫu 
Việc gắn của RNA polymerase vào promoter của gen sẽ quyết định 
việc lựa chọn sợi nào trong hai sợi đơn của DNA làm khuôn mẫu. Promoter, 
ngoài việc mang vị trí gắn RNA polymerase còn chứa đựng thông tin xác 
định sợi nào trong hai sợi đơn của DNA được phiên mã và xác định vị trí 
bắt đầu phiên mã. 
Sinh học phân tử 97 
5. Sự phiên mã được khởi phát không cần mồi 
RNA polymerase có thể khởi đầu sự tổng hợp RNA trên khuôn mẫu 
DNA mà không cần mồi như DNA polymerase. Điều này đòi hỏi 
ribonucleotide đầu tiên được mang đến vị trí bắt đầu phiên mã phải được 
giữ ổn định trên DNA khuôn mẫu trong khi ribonucleotide thứ hai đang 
được đưa đến để xảy ra phản ứng trùng hợp. 
II. Các giai đoạn của quá trình phiên mã 
RNA polymerase tiến hành quá trình phiên mã một gen thông qua 
nhiều bước và được chia thành ba giai đoạn: khởi đầu, kéo dài, và kết thúc. 
1. Giai đoạn khởi đầu 
Đầu tiên, RNA polymerase gắn với promoter của gen (cùng với các 
yếu tố khởi đầu) để tạo thành phức hợp promoter-polymerase. Một khi được 
hình thành, phức hợp này sẽ có sự thay đổi cấu trúc cần thiết cho việc tiến 
hành giai đoạn khởi đầu. 
Giai đoạn khởi đầu này bao gồm ba bước như sau: 
1.1. Phức hợp đóng (closed complex) 
Khi RNA polymerase vừa mới gắn với promoter thì phức hợp tạo 
thành ở trạng thái đóng. Ở trạng thái này, DNA vẫn là chuỗi kép và enzyme 
gắn vào một phía của vòng xoắn. 
1.2. Phức hợp mở (open complex) 
Lúc này DNA xung quanh điểm bắt đầu phiên mã được mở xoắn và 
liên kết giữa các cặp base bổ sung bị phá vỡ. Hai sợi DNA với độ dài 
khoảng 14 bp xung quanh vị trí bắt đầu phiên mã tách rời nhau ra và tạo nên 
vòng phiên mã. Việc mở DNA đã giải phóng sợi khuôn mẫu. Hai nucleotide 
đầu tiên được mang đến vị trí bắt đầu đã được hoạt hóa, chúng xếp hàng 
trên khuôn mẫu và được nối với nhau. RNA polymerase bắt đầu chuyển 
dịch dọc theo sợi khuôn mẫu, mở xoắn phía trước vị trí trùng hợp và tái gắn 
hai sợi DNA phía sau. Bằng cách này, các ribonucleotide tiếp theo được gắn 
Sinh học phân tử 98 
vào chuỗi RNA đang phát triển. Đoạn RNA ban đầu với số lượng 
ribonucleotide ít hơn 10 sẽ bị loại bỏ và enzyme bắt đầu tổng hợp lại. 
1.3. Phức hợp tam nguyên bền (stable ternary complex) 
Một khi enzyme đi được khoảng hơn 10 bp, nó được xem là “thoát” 
khỏi promoter. Lúc này một phức hợp gồm ba thành phần là enzyme, DNA 
và RNA được hình thành và quá trình phiên mã chuyển sang giai đoạn kéo 
dài. 
2. Giai đoạn kéo dài 
Một khi RNA polymerase tổng hợp được một đoạn RNA khoảng 10 
base, nó chuyển sang giai đoạn kéo dài. Sự chuyển giai đoạn này đòi hỏi 
những biến đổi hơn nữa về cấu hình của RNA polymerase làm cho nó càng 
giữ chặt khuôn mẫu hơn nữa. Trong quá trình kéo dài, enzyme này thực hiện 
một loạt nhiều nhiệm vụ rất quan trọng ngoài việc tổng hợp RNA. Nó mở 
xoắn DNA trước mặt và tái gắn DNA phía sau, nó tách dần chuỗi RNA 
đang hình thành ra khỏi khuôn mẫu khi đang di chuyển dọc theo gen, và nó 
còn thực hiện chức năng đọc sửa sai (ở quá trình tái bản DNA, các chức 
năng này do nhiều enzyme khác nhau thực hiện). 
3. Giai đoạn kết thúc 
Khi RNA polymerase phiên mã hết chiều dài của gen (hoặc các gen), 
nó dừng lại và giải phóng sản phẩm RNA. Trong một số tế bào, có những 
trình tự đặc hiệu thúc đẩy giai đoạn kết thúc. Trong một số tế bào khác, 
người ta vẫn chưa rõ yếu tố nào điều khiển enzyme ngừng phiên mã và giải 
phóng RNA khỏi khuôn mẫu. 
III. Phiên mã ở prokaryote 
1. Enzyme RNA polymerase ở prokaryote 
Tế bào prokaryote chỉ chứa một loại RNA polymerase. Enzyme này 
được cấu tạo bởi năm tiểu đơn vị, gồm hai tiểu đơn vị α và các tiểu đơn vị β, 
β’, ω. Các tiểu đơn vị này liên kết với nhau để tạo thành enzyme lõi. 
Sinh học phân tử 99 
Người ta làm thí nghiệm tinh sạch enzyme lõi từ tế bào vi khuẩn rồi 
cho vào dung dịch chứa DNA vi khuẩn và ribonucleotide thì enzyme sẽ gắn 
với DNA và tổng hợp RNA. Tuy nhiên, RNA thu được trong thí nghiệm này 
không giống với RNA trong tế bào vì enzyme đã gắn vào các vị trí không 
thích hợp trên DNA. Nếu cho thêm một loại polypeptide tinh sạch được gọi 
là yếu tố σ trước khi enzyme gắn với DNA thì sự phiên mã sẽ bắt đầu tại 
những vị trí chính xác như trong tế bào. 
Việc gắn yếu tố σ vào enzyme lõi làm tăng ái lực của enzyme với vị 
trí khởi động trên DNA, đồng thời làm giảm ái lực đối với các vùng khác. 
Khi enzyme lõi được gắn thêm yếu tố σ sẽ trở thành dạng holoenzyme. 
2. Promoter của gen ở prokaryote 
Promoter của gen vi khuẩn nằm ngay trước vị trí khởi đầu phiên mã. 
Bằng cách phân tích các trình tự DNA này của một số lượng lớn các gen vi 
khuẩn người ta nhận thấy có hai đoạn ngắn tương đối giống nhau giữa gen 
này và gen khác, mỗi đoạn gồm sáu nucleotide. Đoạn thứ nhất nằm cách vị 
trí khởi đầu khoảng 35 bp, là sự biến đổi của trình tự TTGACA. Đoạn thứ 
hai nằm cách vị trí khởi đầu khoảng 10 bp, là sự biến đổi của trình tự 
TATAAT. Chúng lần lượt được gọi là vùng 35 và vùng 10 (hộp 
Pribnow). 
Đối với các promoter mạnh (ví dụ ở gen mã hóa rRNA), người ta còn 
tìm thấy yếu tố UP làm tăng sự gắn của RNA polymerase vào DNA. Có một 
số promoter thiếu vùng 35 và được thay bằng yếu tố 10 mở rộng, bao 
gồm vùng 10 chuẩn và thêm một đoạn ngắn ở đầu 5’ của nó (ví dụ ở gen 
gal của E. coli). 
Yếu tố σ nhận dạng các vùng 35 và 10 hoặc yếu tố 10 mở rộng 
nhờ các cấu trúc đặc biệt của chúng. Riêng yếu tố UP không được nhận 
dạng bởi σ mà được nhận dạng bởi một vùng ở đầu C tận cùng của tiểu đơn 
vị α, gọi là α CTD (carboxyl terminal domain). 
3. Vai trò của enzyme RNA polymerase và promoter trong quá trình phiên 
mã 
Khi khởi đầu sự phiên mã, RNA polymerase gắn với DNA ở vùng 35 
một cách lỏng lẻo tạo thành phức hợp đóng. Sau đó, enzyme gắn vào 
Sinh học phân tử 100 
promoter chặt hơn và phức hợp chuyển sang trạng thái mở. Một vùng DNA 
được mở xoắn nằm giữa hai vị trí 11 và +3, nghĩa là bao gồm cả vị trí bắt 
đầu phiên mã +1. Sợi đơn DNA làm khuôn mẫu được bộc lộ để sinh tổng 
hợp RNA. 
Một khi RNA polymerase tổng hợp được 10 nucleotide (sau lần khởi 
đầu) thì yếu tố σ rời khỏi enzyme và có thể đến gắn vào promoter khác để 
khởi đầu một quá trình phiên mã mới. Sự tách rời yếu tố σ cho phép hình 
thành một kênh thoát mà thông qua đó phần RNA đã được tổng hợp chui ra 
khỏi enzyme và được kéo dài (Hình 5.1). 
Hình 5.1. Các giai đoạn phiên mã ở prokaryote 
Khởi đầu 
Kết thúc 
Kéo dài 
DNA 
-35 -10 5’ 
 Tái xoắn Mở xoắn 
RNA polymerase 
RNA 
5’ 
RNA được giải phóng 
Cấu trúc 
“kẹp tóc” 
5’ 
Sinh học phân tử 101 
4. Tín hiệu kết thúc 
Tín hiệu kết thúc là những trình tự trên DNA có vai trò thúc đẩy sự 
tách RNA polymerase ra khỏi DNA và giải phóng chuỗi RNA mới được 
tổng hợp. Ở vi khuẩn, có hai loại tín hiệu kết thúc là tín hiệu kết thúc không 
phụ thuộc Rho và tín hiệu kết thúc phụ thuộc Rho. 
4.1. Tín hiệu kết thúc không phụ thuộc Rho 
Đó là một cấu trúc đặc biệt bao gồm hai trình tự đối xứng bổ sung 
nhau giàu GC, tiếp theo sau là một loạt 8 adenine (chúng sẽ được phiên mã 
thành 8 uracil). Những trình tự này không ảnh hưởng đến RNA polymerase 
cho đến sau khi chúng được phiên mã. Khi đó các trình tự đối xứng bổ sung 
trên RNA sẽ bắt cặp với nhau và tạo nên cấu trúc hình chiếc kẹp tóc (Hình 
5.2). Cấu trúc kẹp tóc này đã phá vỡ phức hợp kéo dài hoặc bằng cách thúc 
đẩy mở kênh thoát cho RNA trên RNA polymerase hoặc bằng cách phá vỡ 
mối tương tác RNA-khuôn mẫu DNA 
Hình 5.2. Cấu trúc kẹp tóc 
Cấu trúc kẹp tóc này chỉ hoạt động hiệu quả khi nó được theo sau bởi 
một loạt U. Tại thời điểm cấu trúc kẹp tóc được hình thành, chuỗi RNA 
đang phát triển vẫn được giữ trên khuôn mẫu chỉ bằng các liên kết giữa A-
U. Vì liên kết A-U yếu hơn G-C nên chúng dễ dàng bị phá vỡ bởi hiệu quả 
của cấu trúc kẹp tóc, và vì thế RNA dễ dàng được giải phóng. 
4.2. Tín hiệu kết thúc phụ thuộc Rho 
Tín hiệu này là những thành phần RNA mà muốn hoạt động, đòi hỏi 
phải có yếu tố Rho. Yếu tố Rho là một protein hình nhẫn (ở E. coli có khối 
5’ 3’ 
Sinh học phân tử 102 
lượng phân tử khoảng 50 kDa) gồm sáu tiểu đơn vị giống hệt nhau. Yếu tố 
này có hoạt tính ATPase: khi gắn vào sản phẩm phiên mã, nó sẽ sử dụng 
năng lượng từ sự thủy phân ATP để kéo RNA ra khỏi khuôn mẫu và 
polymerase. 
Yếu tố Rho điều khiển phân tử RNA đặc biệt nhờ tính đặc hiệu. Thứ 
nhất là tính đặc hiệu tại những vị trí nó gắn, đó là những đoạn khoảng 40 
nucleotide mà không gấp lại thành cấu trúc bậc hai, chúng thường giàu C. 
Tính đặc hiệu thứ hai là yếu tố Rho giảm gắn với bất kỳ sản phẩm phiên mã 
nào đang được dịch mã (nghĩa là những sản phẩm đang gắn ribosome). Ở vi 
khuẩn, phiên mã và dịch mã được song hành chặt chẽ: dịch mã khởi phát 
ngay trên RNA đang được tổng hợp kể từ khi RNA bắt đầu chui ra khỏi 
RNA polymerase. Vì vậy Rho chỉ kết thúc những sản phẩm vẫn đang được 
phiên mã ở quá đầu tận cùng của gen hoặc operon. 
IV. Quá trình phiên mã ở eukaryote 
1. Cấu trúc gen ở eukaryote 
Cấu trúc một gen mã hóa cho protein của eukaryote bao gồm các vùng 
sau: 
1.1. Vùng 5’ kiểm soát biểu hiện gen 
Vùng này bao gồm các trình tự nucleotide điều hòa biểu hiện gen và 
hoạt hóa sự phiên mã, bao gồm: 
- Promoter. Là những trình tự định vị ở đầu 5’ không dịch mã của 
gen có chức năng xác định vị trí bắt đầu phiên mã, kiểm soát số lượng 
mRNA và đôi khi cả tính đặc hiệu mô (tissue-specific). Promoter có thể dài 
đến vài nghìn bp. Vùng này thường chứa một trình tự bảo thủ gọi là hộp 
TATA nằm cách vị trí phiên mã khoảng 25-30 bp. Hộp này giúp xác định 
chính xác vị trí bắt đầu phiên mã. Ngoài ra, còn có hộp CCAAT nằm cách 
vị trí bắt đầu phiên mã khoảng 75-80 bp. Hộp này ít phổ biến hơn hộp 
TATA, nó có chức năng tăng hiệu quả phiên mã. Một số gen “quản gia” mã 
hóa cho các enzyme hiện diện ở tất cả các tế bào thường thiếu cả hai hộp 
này và promoter rất giàu GC. Ngoài ra, còn có các thành phần đặc hiệu 
khác. 
Sinh học phân tử 103 
- Vị trí gắn vùng đặc hiệu mô. Là trình tự DNA tương tác với protein 
đặc hiệu mô để chỉ huy gen cấu trúc sản xuất ra từng protein đặc hiệu của 
từng mô. 
- Vị trí gắn với vùng tăng cường phiên mã (enhancer). Còn gọi là 
gen tăng cường, là những trình tự DNA được gắn với các tác nhân hoạt hóa 
để kích thích phiên mã của các gen kề bên, chúng có thể tác động qua một 
khoảng cách xa và có thể tác động theo hai phía (từ 5’ hoặc 3’ tới). 
1.2. Vùng được phiên mã 
Bao gồm các exon và intron nằm xen kẽ. Đây là một đặc điểm để phân 
biệt với gen của prokaryote. Các exon và intron đều được phiên mã nhưng 
chỉ có các exon là được dịch mã. Các intron được bắt đầu bằng GT và kết 
thúc bằng AG. Các intron chiếm phần lớn trong mỗi gen và chúng sẽ được 
loại bỏ khỏi RNA mới được tổng hợp, còn các exon được nối với nhau để 
tạo nên mRNA hoàn chỉnh (mature mRNA). 
Ở hai đầu của vùng được phiên mã (coding region) còn có vùng 5’ 
không dịch mã (5’ untranslation region) và vùng 3’ không dịch mã (3’ 
untranslation region). Vùng 5’ không dịch mã được tính từ vị trí bắt đầu 
phiên mã cho đến codon khởi đầu ATG. Vùng 3’ không dịch mã bắt đầu từ 
codon kết thúc đến vị trí gắn đuôi poly(A). 
1.3. Vùng 3’ không dịch mã 
Chức năng chưa rõ, ở một số gen vùng này mang các trình tự điều hòa 
chuyên biệt. 
2. Enzyme RNA polymerase của eukaryote 
Tế bào eukaryote có đến ba loại RNA polymerase là RNA polymerase 
I (pol I), RNA polymerase II (pol II), và RNA polymerase III (pol III). 
Trong đó, RNA polymerase II đảm nhận việc phiên mã cho hầu hết các gen, 
chủ yếu là gen mã hóa cho protein. RNA polymerase I phiên mã các gen 
tiền thân của rRNA lớn và RNA polymerase III phiên mã các gen tRNA, 
một số gen RNA kích thước nhỏ của nhân (small nuclear, snRNA) và RNA 
5S. Các RNA polymerase của eukaryote cũng bao gồm nhiều tiểu đơn vị, 
Sinh học phân tử 104 
trong đó có những tiểu đơn vị tương ứng với các tiểu đơn vị trong enzyme 
của vi khuẩn. 
Bảng 5.1. Các tiểu đơn vị của RNA polymerase 
Prokaryote Eukaryote 
Vi khuẩn Archaea RNA pol I RNA pol II RNA pol III 
β’ 
β 
α’ 
α” 
ω 
A’/A” 
B 
D 
L 
K 
(+6) 
RPA1 
RPA2 
RPC5 
RPC9 
RPB6 
(+9) 
RPB1 
RPB2 
RPB3 
RPB11 
RPB6 
(+7) 
RPC1 
RPC2 
RPC5 
RPC9 
RPB6 
(+11) 
3. Các yếu tố giúp RNA polymerase khởi đầu phiên mã 
Trong khi RNA polymerase của prokaryote chỉ cần thêm một yếu tố 
khởi đầu là σ để khởi động phiên mã thì RNA polymerase của eukaryote 
phải cần nhiều yếu tố khởi đầu, các yếu tố này được gọi là các yếu tố phiên 
mã tổng quát. Mặt khác, sự khởi đầu phiên mã ở eukaryote còn phải đối mặt 
với hiện tượng các DNA được đóng gói trong nucleosome và các dạng cao 
hơn của cấu trúc chromatin. Điều này đòi hỏi phải có nhiều yếu tố khác 
thêm vào để giúp khởi động quá trình phiên mã. 
3.1. Vai trò của các yếu tố phiên mã tổng quát 
Các yếu tố phiên mã tổng quát giúp RNA polymerase vào đúng vị trí 
trên promoter, giúp tách hai sợi đơn của DNA ra để phiên mã được bắt đầu, 
và giải phóng RNA polymerase khỏi promoter một khi phiên mã đã được 
khởi động xong để đi vào giai đoạn kéo dài. 
Các yếu tố này được gọi là “tổng quát” vì chúng gắn trên tất cả các 
promoter được sử dụng bởi RNA polymerase II. Do đó, chúng được viết tắt 
là TFII (transcription factor for polymerase II), bao gồm TFIIA, TFIIB... 
Sinh học phân tử 105 
Như đã mô tả ở trên, nhiều promoter của eukaryote chứa hộp TATA. 
Hộp này được nhận dạng bởi một tiểu đơn vị của TFIID là TBP (TATA 
binding protein: protein gắn TATA). Phức hợp TBP-DNA tạo nên một cái 
nền để thu hút các TFII khác và RNA polymerase đến promoter. In vitro, 
các yếu tố phiên mã tổng quát khác đến gắn vào promoter theo thứ tự sau: 
TFIIA, TFIIB, TFIIF cùng RNA polymerase II, TFIIE và TFIIH. Sau đó, 
vùng promoter được mở xoắn. Khác với vi khuẩn, sự mở xoắn ở đây cần có 
năng lượng cung cấp từ sự thủy phân ATP nhờ TFIIH (yếu tố này có hoạt 
tính giống helicase). 
Sau đó cũng xảy ra hiện tượng khởi đầu sẩy giống như ở prokaryote 
cho đến khi có sự biến đổi về cấu hình nhằm giải phóng RNA polymerase II 
khỏi promoter và đi vào giai đoạn kéo dài. Tuy nhiên, ở đây có một bước 
mà không tìm thấy ở prokaryote đó là sự gắn thêm các gốc phosphate vào 
đuôi của RNA polymerase (đuôi này còn được gọi là CTD: carboxyl 
terminal domain). Sự phosphoryl hóa này cũng được xúc tác bởi TFIIH nhờ 
hoạt tính protein kinase của nó (Hình 5.3). 
3.2. Vai trò của các tác nhân hoạt hóa, phức hợp trung gian và enzyme biến 
đổi chromatin. 
Ngoài các yếu tố phiên mã tổng quát, RNA polymerase II còn cần sự 
hỗ trợ của các yếu tố khác (Hình 5.4). 
Đầu tiên, cần có các tác nhân hoạt hóa phiên mã (transcriptional 
activator) đến gắn vào các trình tự đặc hiệu trên DNA (các enhancer) để hấp 
dẫn RNA polymerase II đến vị trí bắt đầu phiên mã. Sự hấp dẫn này cần 
thiết để RNA polymerase II và các yếu tố phiên mã tổng quát vượt qua trở 
ngại khi gắn với DNA được đóng gói trong chromatin. 
Tiếp đến, sự khởi đầu phiên mã in vivo còn cần sự hiện diện của các 
protein tạo thành phức hợp trung gian (mediator complex). Phức hợp này 
cho phép tác nhân hoạt hóa tác động tốt lên RNA polymerase II và các yếu 
tố phiên mã tổng quát. 
Cuối cùng, sự phiên mã còn cần các enzyme biến đổi chromatin, bao 
gồm phức hợp tái tạo mô hình chromatin (chromatin remodeling complex) 
và enzyme histone acetylase. Cả hai có tác dụng giúp cho bộ máy khởi đầu 
phiên mã có thể gắn vào DNA trong chromatin một cách dễ dàng. 
Sinh học phân tử 106 
Hình 5.3. Các yếu tố phiên mã tổng quát giúp khởi đầu phiên mã 
Như vậy, có rất nhiều protein gắn vào promoter để khởi động sự phiên 
mã ở eukaryote. Thứ tự gắn của các protein này thay đổi đối với các gen 
khác nhau. Thực tế, một số có thể gắn với nhau ở xa DNA rồi được mang 
TBP 
TFIIA 
Hộp TATA 
RNA polymerase II 
TFIIF 
TFIIE 
TFIIH 
Sinh học phân tử 107 
đến DNA dưới dạng phức hợp. Ví dụ: phức hợp trung gian, RNA 
polymerase II, và một số yếu tố phiên mã tổng quát có thể gắn với nhau 
trong nhân tương rồi được mang đến DNA. 
Hình 5.4. Các tác nhân hoạt hóa, phức hợp trung gian và các thành phần biến 
đổi nucleosome trong phiên mã 
4. Các yếu tố kích thích RNA polymerase II hoạt động trong giai đoạn kéo 
dài 
Một khi RNA polymerase II bắt đầu chuyển sang giai đoạn kéo dài thì 
các yếu tố khởi đầu được loại bỏ như yếu tố phiên mã tổng quát và phức 
hợp trung gian. Thay vào đó, các yếu tố kích thích giai đoạn kéo dài được 
thu hút đến, bao gồm TFIIS và hSPT5. Ngoài ra, còn có các yếu tố khác 
được huy động để phục vụ cho quá trình biến đổi RNA mới được tổng hợp. 
Giai đoạn kéo dài trong phiên mã được song hành chặt chẽ với các 
bước biến đổi RNA mới được tổng hợp. Như đã phân tích ở trên, có một 
bước quan trọng diễn ra khi chuyển từ giai đoạn khởi đầu sang kéo dài là sự 
phosphoryl hóa đuôi CTD của RNA polymerase II. Sự phosphoryl hóa này 
không những giúp RNA polymerase II thoát khỏi các protein ở vị trí bắt đầu 
phiên mã mà còn cho phép các protein khác đến kết hợp với đuôi để giúp 
quá trình kéo dài phân tử RNA và biến đổi RNA tiền thân. 
Tác nhân 
hoạt hóa 
Phức hợp 
trung gian 
Phức hợp 
tái mô hình 
chromatin 
HAT 
RNA polymerase II 
Sinh học phân tử 108 
5. Quá trình biến đổi các RNA mới được tổng hợp 
Ở eukaryote, sự phiên mã chỉ là bước đầu tiên trong một loạt các phản 
ứng bao gồm cả sự biến đổi hai đầu của mRNA tiền thân và loại bỏ các 
intron để tạo thành mRNA hoàn chỉnh. 
5.1. Sự gắn mũ vào đầu 5’ 
Ngay khi RNA polymerase II vừa mới tạo ra khoảng 25 
ribonucleotide của RNA, đầu 5’ của phân tử RNA này được biến đổi bằng 
cách gắn thêm một cái mũ là guanine có biến đổi hóa học. Phản ứng gắn mũ 
được thực hiện bởi ba loại enzyme là: 
- Phosphatase có tác dụng loại một gốc phosphate khỏi đầu 5’ của 
RNA mới sinh. 
- Guanylyl transferase gắn GMP bằng liên kết đảo ngược (5’ với 5’ 
thay vì 5’ với 3’) vào đầu 5’ của RNA đang được tổng hợp. 
- Methyl transferase gắn nhóm methyl vào guanosine (Hình 5.5). 
Trong nhân, mũ gắn với một phức hợp protein được gọi là CBC 
(CAP-binding complex: phức hợp gắn mũ) giúp RNA được xử lý tốt và 
được chuyển ra ngoài. Mũ 5’ còn có vai trò quan trọng trong quá trình dịch 
mã mRNA trong bào tương. 
5.2. Sự gắn đuôi poly(A) vào đầu 3’ và kết thúc phiên mã 
Sự gắn đuôi poly(A) vào đầu 3’ được liên kết với sự kết thúc phiên 
mã. Các enzyme cần thiết cho các quá trình này được tập trung trên đuôi 
CTD của RNA polymerase II, bao gồm CPSF (cleavage and 
polyadenylation specificity factor: yếu tố đặc hiệu tách RNA và gắn đuôi 
polyA) và CstF (cleavage stimulation factor: yếu tố kích thích tách RNA). 
Khi RNA polymerase di chuyển đến cuối gen, nó gặp những trình tự 
đặc hiệu (được gọi là tín hiệu polyA). Trình tự này được phiên mã thành 
RNA, thúc đẩy chuyển CPSF và CstF đến gắn vào đoạn RNA này. Sau đó 
các protein khác sẽ được tập trung đến để khởi đầu sự tách rời RNA và gắn 
đuôi poly(A). 
Sự gắn đuôi được thực hiện bởi enzyme poly(A) polymerase (PAP). 
Enzyme này thêm khoảng từ vài chục đến 200-250 adenine vào đầu 3’ của 
Sinh học phân tử 109 
RNA đã được tách ra. Enzyme PAP sử dụng ATP làm cơ chất và hoạt động 
giống RNA polymerase, tuy nhiên không có khuôn mẫu. Người ta vẫn chưa 
rõ yếu tố nào quyết định chiều dài của đuôi nhưng quá trình này có liên 
quan đến các protein gắn đặc hiệu với đuôi poly(A). 
Sau khi RNA được tách ra và gắn đuôi poly(A), RNA polymerase vẫn 
chưa kết thúc phiên mã ngay. Nó còn tiếp tục di chuyển dọc theo khuôn mẫu 
và tạo ra một phân tử RNA thứ hai có thể dài hàng trăm nucleotide trước khi 
kết thúc. Sau đó, RNA polymerase được tách ra khỏi khuôn mẫu, giải phóng 
RNA mới và RNA này sẽ bị giáng hóa. 
Hình 5.5. Phản ứng gắn mũ vào đầu 5’ của RNA 
3’ HO 
3’ HO 
3’ HO 
3’ HO 
H3C 
7 methyl 
RNA triphosphatase 
Guanylyl transferase 
Methyl transferase 
base base 
 5’ 5’ 3’ 
α β 
α β 
 5’ 3’ 
 5’ 5’ 
3’ 
 5’ 5’ 
3’ 
Sinh học phân tử 110 
5.3. Quá trình cắt nối gen (splicing) 
Đây là quá trình loại bỏ các intron và nối các exon lại với nhau. Quá 
trình này được thực hiện phần lớn bởi các RNA thay vì protein. 
Các phân tử RNA này tương đối ngắn (dưới 200 nucleotide) được gọi 
là snRNA. Có năm loại liên quan đến dạng cắt nối chính là U1, U2, U4, U5 
và U6. Mỗi snRNA được kết hợp với nhiều protein để hình thành snRNP. 
Có ba trình tự nằm trên intron đóng vai trò quan trọng trong quá trình 
cắt nối là: vị trí cắt nối đầu 5’, vị trí phân nhánh là một trình tự giàu các 
pyrimidine bao quanh một nucleotide adenine ở gần đầu 3’, và vị trí cắt nối 
đầu 3’. 
Đầu tiên, vị trí cắt nối đầu 5’ được nhận dạng bởi U1 snRNP bằng sự 
bắt cặp các base bổ sung. Vị trí phân nhánh cũng được nhận dạng bởi BBP 
(branch-point binding protein: protein gắn vị trí phân nhánh) và U2AF. U2 
snRNP đến thay thế BBP (nhờ U2AF giúp đỡ). Sự bắt cặp base giữa U2 
snRNA và vị trí phân nhánh làm thừa ra một gốc A không bắt cặp và sẵn 
sàng phản ứng với vị trí 5’. Sau đó U4 và U6 snRNP cùng U5 snRNP đến 
gắn với phức hợp trên. 
Dạng U1 rời khỏi phức hợp và U6 thế chỗ U1 tại vị trí cắt nối đầu 5’. 
U4 được giải phóng để U6 tương tác với U2. Điều này làm cho vị trí cắt nối 
đầu 5’ và vị trí phân nhánh được đặt kề nhau và tạo điều kiện cho phản ứng 
cắt nối xảy ra. Nucleotide adenine đặc hiệu ở vị trí phân nhánh tấn công và 
cắt intron ở vị trí đầu 5’. Đồng thời có một liên kết đồng hóa trị xảy ra giữa 
A ở vị trí phân nhánh và đầu 5’ của intron tạo nên một cấu trúc hình thòng 
lọng. Đầu 3’ của exon trước nối với đầu 5’ của exon kế tiếp và thòng lọng 
intron được giải phóng (Hình 5.6). 
V. Phiên mã ngược 
Phiên mã ngược là quá trình tổng hợp DNA dựa trên khuôn mẫu 
RNA. Quá trình này được xúc tác bởi một loại enzyme đặc biệt gọi là 
enzyme phiên mã ngược (RT: reverse transcriptase). Enzyme này có cả hoạt 
tính DNA polymerase và hoạt tính RNase H. Cũng giống như DNA 
polymerase trong quá trình tái bản DNA, enzyme phiên mã ngược đòi hỏi 
phải có primer (mồi) đặc biệt để tổng hợp nên DNA mới. 
Sinh học phân tử 111 
Hình 5.6. Quá trình cắt nối gen 
3’ 
3’ 
3’ 
3’ 
3’ 
3’ 
3’ 5’ 
5’ 
5’ 
5’ 
5’ 
5’ 
snRNPs 
snRNP 
Sinh học phân tử 112 
Enzyme phiên mã ngược được phát hiện lần đầu tiên ở retrovirus. Sau 
khi các retrovirus đi vào tế bào vật chủ, genome của RNA của nó sẽ được 
phiên mã ngược thành DNA sợi đôi, rồi tích hợp vào DNA của vật chủ. Quá 
trình phiên mã ngược này khá phức tạp, người ta có thể tóm tắt thành 10 
bước như sau: 
- Bước 1: Một tRNA của tế bào có tính đặc hiệu với retrovirus đóng 
vai trò primer để khởi phát quá trình phiên mã ngược. Primer lai với vùng 
bổ sung trên genome của RNA của retrovirus gọi là vị trí gắn primer (PBS: 
primer-binding site). 
- Bước 2: Một đoạn DNA được kéo dài từ tRNA có trình tự bổ sung 
với trình tự của genome RNA của retrovirus. 
- Bước 3: Trình tự R đầu 5’ và U5 của virus bị loại bỏ bởi RNase H. 
- Bước 4: Đổi khuôn mẫu lần thứ nhất (first template exchange) còn 
được gọi là “nhảy” lần một: DNA đến lai với trình tự R còn lại ở đầu 3'. 
- Bước 5: Một sợi DNA được kéo dài từ đầu 3’. 
- Bước 6: Hầu hết RNA virus bị loại bỏ bởi RNase H. 
- Bước 7: Sợi DNA thứ hai được kéo dài từ RNA còn lại của virus. 
- Bước 8: Cả tRNA và phần RNA còn lại của virus bị loại bỏ bởi 
RNase H. 
- Bước 9: Đổi khuôn mẫu lần thứ hai (“nhảy” lần hai): vùng PBS của 
sợi DNA thứ hai đến lai với vùng PBS của sợi thứ nhất. 
- Bước 10: Kéo dài cả hai sợi DNA. 
R là những trình tự lặp lại trên genome của retrovirus (ở đầu 5’ và 3’), 
U5 và U3 là những vùng mã hóa cho những tín hiệu tích hợp ở đầu 5’ và 3’ 
(Hình 5.7). 
Ngày nay, người ta cũng phát hiện enzyme phiên mã ngược ở các 
virus động vật khác như hepadnavirus, và ở các virus thực vật như 
caulimovirus. Tất cả chúng được gọi là retrovirus. Ngoài ra, người ta còn 
phát hiện hoạt tính enzyme phiên mã ngược ở một số dòng của 
myxobacteria và E. coli. Enzyme phiên mã ngược đã trở thành một công cụ 
không thể thiếu trong sinh học phân tử. Nó giúp các nghiên cứu viên phiên 
mã ngược mRNA của tế bào thành cDNA (complementary DNA), rồi sau 
đó có thể khuếch đại, tạo dòng và biểu hiện bằng các phương pháp đặc biệt. 
Sự phát hiện enzyme phiên mã ngược ở nhiều loại virus và đặc biệt là ở một 
Sinh học phân tử 113 
số vi khuẩn cũng có ý nghĩa quan trọng trong việc nghiên cứu sự tiến hóa 
của hệ thống sinh giới. 
Hình 5.7. Quá trình phiên mã ngược của retrovirus 
U3 R U5 
U3 R U5 
PBS 
3’ 
5’ 3’ 
PBS 
DNA của retrovirus 
3’ 
PBS 
PBS 
5’ 
5’ 
3’ 
(8) 
(10) 
U3 R U5 
PBS 
3’ 
5’ 
5’ (9) 
U3 R U5 
U3 R U5 
Bộ gen RNA của 
retrovirus 
U3 R U5 
5’ 3’ 
3’ 
PBS 
U3 R U5 
U3 R U5 
PBS 
3’ 
PBS 
3’ 
5’ 
R U5 
PBS 
tRNA 
5’ 
3’ 
U3 R 3’ (1) 
 U3 R 
 U3 R U5 
PBS 
PBS 
5’ 
3’ 
3’ 
(5) 
(6) 
(7) 
5’ 
PBS 
R U5 
U3 R 3’ 
(4) 3’ 
U3 R 
R U5 
PBS 
5’ 3’ 
(3) 3’ 
PBS 
3’ U3 R 
tRNA 
5’ 
3’ 
DNA 
R U5 
(2) 
R U5 
U3 R U5 
U3 R U5 
U3 R U5 
tRNA 
tRNA 
tRNA 
tRNA 
tRNA 
tRNA 
3’ 
Sinh học phân tử 114 
Tài liệu tham khảo/đọc thêm 
1. Hồ Huỳnh Thùy Dương. 1998. Sinh học phân tử. NXB Giáo dục, Hà 
Nội. 
2. Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K and Walter P. 
2002. Molecular Biology of the Cell. 4
th
 ed. Garland Science Publishing, Inc. New 
York, USA. 
3. Flint SJ. 2000. Principles of Virology: Molecular Biology, Pathogenesis, 
and Control. ASM Press, Washington, USA. 
4. Gelehrter TD, Collins FS and Ginsburg D. 1998. Principles of Medical 
Genetics. 2
nd
 ed. Williams & Wilkins Company, Baltimore, USA. 
5. Griffiths AJF, Wessler SR, Lewontin RC, Gelbart WM, Suzuki DT 
and Miller JH. 2005. An Introduction to Genetic Analysis. WH Freeman & Co. 
New York, USA. 
6. Karp G. 2002. Cell and Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc. New 
York, USA. 
7. Watson JD, Baker TA, Bell SP, Gann A, Levine M and Losick R. 
2004. Molecular Biology of the Gene. Pearson Education, Inc./Benjamin 
Cummings Publishing, San Francisco, USA.